MITA介导的细胞抗病毒反应信号转导及其调节机制 钟波 著 下载 极速 rtf epub 在线 word txt pdf

本书利用表达隆的方法，发现了一个参与病毒感染诱导i型干扰素表达的蛋白，命名为mita，以mita为诱饵蛋白进行了酵母双杂交实验，筛选得到一个与mita相互作用的泛素连接酶rnf5。本论文的研究成果不仅深化了研究者对细胞抗病毒反应机理的认识，也为未来治疗病毒感染引发的相关疾病提供了分子靶标。

第一章 研究背景

第一节 抗病毒天然免疫概述

一、天然免疫简介

二、抗病毒天然免疫反应信号转导概述

三、I型干扰素转录激活机制

第二节 PRRs及其介导的天然抗病毒免疫反应信号转导

一、识别病毒的模式识别受体及其对病毒的识别

二、PRRs协同作用介导细胞抗病毒反应

三、PRRs介导的细胞抗病毒反应信号转导

第三节 PRRs介导的信号转导的调节机制

一、阻断介导信号转导的分子间的相互作用

二、降解介导信号转导的蛋白

三、调节信号分子的去泛素化

四、其他

第二章 实验材料与实验方法

第一节 实验材料

一、荧光素酶报告基因实验相关材料

二、细胞、细胞因子与细胞培养

三、载体构建所需材料

四、酵母双杂交所需材料

五、免疫共沉淀以及Western blot实验相关材料

第二节 实验方法

一、质粒构建、DNA纯化、磷酸钙沉淀转梁293细胞、免疫共沉淀、Westem blot与RNA blot

二、荧光素酶报告基因实验

三、表达克隆筛选

四、酵母双杂交实验

五、亚细胞器分离实验

六、RT―PCR实验

七、VSV空斑实验

八、泛素化实验

九、LC―MS／MS鉴定MITA磷酸化位点

十、免疫荧光与激光共聚焦显微镜观察

十一、非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳

十二、原代细胞的培养与转染

十三、32P in vivo标记细胞与放射自显影实验

十四、体外泛素化实验

第三章 实验结果与讨论

第一节 MITA介导的信号转导机制

一、研究背景与立项依据概述

二、MITA的鉴定与表达分析

三、过表达MITA能有效激活IRF3

四、RNAi下调MITA的表达抑制seV诱导的IFN―B的表达

五、MITA定位于线粒体

六、MITA与VISA、RIG―I相互作用

七、MITA作为支架蛋白促进TBK1―IRF3的相互作用

八、TBK1介导MITA的磷酸化促进MITA对IRF3的激活

九、小结与讨论

第二节 RNF5对MITA介导信号转导的调节

一、研究背景和立项依据概述

二、RNF5是MITA相互作用蛋白

三、过表达RNF5抑制病毒感染引起的IFN―β的激活

四、RNAi下调RNF5的表达促进病毒感染引起的IFN―β的激活

五、RNF5在MITA水平调节细胞抗病毒反应

六、RNF5催化MITA泛素化降解

七、RNF5催化MITA泛素化发生在MITA K150

八、RNF5在线粒体泛素化MITA

九、小结与讨论

第三节 RNF5催化VISA泛素化降解

一、研究背景与立项依据概述

二、病毒感染诱导RNF5与VISA相互作用

三、RNF5诱导VISA通过泛素蛋白酶体途径降解

四、RNF5泛素化VISA发生在K361和K462

五、RNF5对VISA的泛素化独立于Itch

六、小结与讨论

第四节 研究总结与展望

参考文献

缩略词表

致谢

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